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硫化.氢H2S含量测定试剂盒说明书

发布时间:2021-09-23 14:36 |  点击次数:

硫化.氢H2S含量测定试剂盒说明书仅供研究用
货号:QYS-236083
分光光度法 50管/48样
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义

H2S 是一种新型气态信号分子,存在于脑内的神经递质,生理浓度的 H2S 对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用,并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。
测定原理

硫化.氢H2S含量测定试剂盒说明书H2S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯/二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝,亚甲基蓝在 665nm 处有最大吸收峰,通过测定其吸光值可计算 H2S 含量
自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 15mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂:液体 3mL×1 瓶,4℃避光保存。
标准品:液体0.125μmol/ml×1 管,4℃避光保存。
样品处理
 

  1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL) 15~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
 
  1. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~10001 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g4,离心 10min,取上清置于冰上待测。
 
  1. 血清(浆):直接测定

操作表( 1.5 mL 离心管,按照下表操作)
  空白管 测定管 标准管
 
样品(μL   250 250
蒸馏水μL 250    
试剂一(μL 250 250 250
充分震荡混匀
试剂二(μL 250 250 250
充分震荡混匀
试剂三(μL 250 250 250
充分震荡混匀
试剂μL 50 50 50
12000rpm,4℃,离心10min,取1mL 上清混匀,25℃静置 20min,于比色皿,测定665nm吸光值,记为A空白、A测定、A标准。


H2S 计算公式
 
  1. 按照蛋白浓度计算
H2S(μmol/mg prot)= 0.125×(A测定 - A空白) ÷ (A标准 - A空白) ÷Cpr
  1. 按照样本重量计算
H2Sμmol/g= 0.125×(A测定 - A空白) ÷ (A标准 - A空白) ÷W
  1. 细胞样本
H2Sμmol/104 cell=0.125×(A测定 - A空白) ÷ (A标准 - A空白) ÷细胞数量
  1. 液体样品
H2Sμmol/L= 0.125× (A测定 - A空白) ÷  (A标准 - A空白)

硫化.氢H2S含量测定试剂盒说明书
注意事项

如样本OD值大于标准品OD,可稀释样本后检测。
 
 
人体血清

兔血清

牛血清

大鼠血清

大鼠血浆

参考值

1.16微摩尔

1.55微摩尔

6.18微摩尔

1.88微摩尔

45至301微摩尔